1. 在96孔,384孔,或其它大小的细胞培养板铺合适密度的待转染细胞。
2. 准备待转染核酸。
3. 建议使用Opti-MEM进行转染试剂与核酸的混合孵育。
4. 在生物安全柜中进行转染试剂与核酸的混合孵育。
5. 根据转染细胞面积大小计算所需要的核酸总量,转染增强剂 E及脂质体试剂L试剂总量。
6. 各试剂先用10倍体积的Opti-MEM稀释,先将稀释后的核酸与稀释后的E试剂混合,室温放置5分钟后,再加稀释后的L试剂,充分混合后,室温静置20分钟,然后滴加到对应细胞培养孔中,轻轻摇晃几下混匀。
7. 推荐起始实验安排如下:
a) 推荐核酸,L及E试剂比例关系:按核酸 mg数:E ml数:L ml数1:2:3的比例关系进行转染试剂配制混合。如果观察到细胞毒性比较大,适当减少L 试剂用量。
b) 推荐核酸用量:6孔板每孔2.5mg核酸,96孔板每孔0.1mg核酸
转染后24~72小时检测目标基因表达