1) 在96孔或384孔黑板中进行反应,建议96孔板反应体积为100 μL,384孔板反应体积为25 μL。
2) 设置背景孔、100%活性孔、阳性对照孔和实验孔:
①背景孔:每孔加入75 μL /10 μL(96孔板/384孔板)1×检测缓冲液,再加入5 μL溶解抑制剂用的溶剂。
②100%活性孔:每孔加入65 μL /5 μL(96孔板/384孔板)1×检测缓冲液,再加入10 μL /5 μL(96孔板/384孔板)FSP1和5 μL溶解抑制剂所用的溶剂。
③阳性对照孔:每孔加入65 μL /5 μL(96孔板/384孔板)1×检测缓冲液,再加入10 μL /5 μL(96孔板/384孔板)FSP1和5 μL试剂盒中提供的FSP 1 抑制剂。
④样本孔:每孔加入65 μL /5 μL(96孔板/384孔板)1×检测缓冲液,再加入10 μL /5 μL
(96孔板/384孔板)FSP 1和5 μL 测试抑制剂。
3) 加好后,轻轻振荡20s,室温(22~25℃),避光,孵育10 min。
4) 每孔加入10 μL /5 μL(96孔板/384孔板)Resazurin,再每孔加入10 μL /5 μL(96孔板/384孔板)NADH,轻轻振荡20s,室温(22~25℃),避光,孵育15 min。
5) 用 540 nm 的激发波长和 590 nm 的发射波长读板。